中藥制劑對獼猴桃樹相關(guān)酶活性的誘導作用

時間：2018-11-06作者：濰坊奧豐作物病害防治有限公司瀏覽：30

沃豐素”和“靚果安”對獼猴桃樹相關(guān)酶活性的誘導作用

劉歡  趙磊

西北農(nóng)林科技大學植物保護學院

陜西是我國的果業(yè)大省，獼猴桃產(chǎn)業(yè)在我省發(fā)展迅速，2009年我省種植面積已達60萬畝，占全國總栽種面積的30%，陜西省政府認為，獼猴桃是一個具有競爭優(yōu)勢的朝陽富民產(chǎn)業(yè)，規(guī)劃到2015年，全省獼猴桃面積發(fā)展到100萬畝，產(chǎn)量達80萬噸，再形成一個農(nóng)民增收的支柱產(chǎn)業(yè)。目前生產(chǎn)上，獼猴桃潰瘍病發(fā)生危害嚴重，果園病株率平均達40%左右，部分重病區(qū)病株率達70%以上甚至導致毀園，獼猴桃潰瘍病病株率普遍達到30%以上，嚴重果園達到80%以上，很多果園因死樹率太高而導致農(nóng)民砍樹毀園，損失非常嚴重，給果農(nóng)帶來了巨大的損失，已成為制約陜西省果業(yè)生產(chǎn)發(fā)展和出口的重要因素。

誘導抗性是利用致病菌、弱毒小種接種或化學物質(zhì)激發(fā)植物的防衛(wèi)基因, 從而達到防病的效果, 在實踐上已有成功應用的報道, 例如水楊酸既是一種極具代表性的植物抗病蛋白誘導劑, 也是植物體內(nèi)普遍存在的一種酚類化合物, 能誘導植物提高抗病性。本研究通過大田試驗, 探討沃豐素和靚果安對獼猴桃潰瘍病的抑菌作用, 并從酶學途徑研究了其抑菌機理, 以期為獼猴桃潰瘍病防治提供可靠藥劑。

1 材料與方法

1.1供試藥劑和材料

靚果安和沃豐素由濰坊奧豐作物病毒防治有限公司提供。兩年生的海沃德品種獼猴桃苗，在西北農(nóng)林科技大學植病試驗站進行種植。

1.2 供試病原菌

獼猴桃細菌性潰瘍病原菌Pseudomonas syringae pv. actinidae,由陜西﹒楊凌田間采集分離得到并保存于西北農(nóng)林科技大學植物病毒實驗室。

1.3材料處理

藥劑處理方法：采用沃豐素200倍液灌根，同時輔以靚果安200倍液噴霧

A. 沃豐素和靚果安 治療組（先接菌后處理）

B. 沃豐素和靚果安 預防組（先處理后接菌）；

C. 發(fā)病對照（只接菌）；

D. 健康對照；

病原細菌的接種方法采用針刺法，接菌后保濕。在不同時間（1、2、4、7、9天）隨機取各個處理的同一葉位葉片，保存于-40℃冰箱。

1.4 酶液提取和酶活性測定方法

PPO酶液提?。悍Q取葉片1g，在冰浴中研磨充分，加入2ml蒸餾水，離心前在-20℃冰箱預冷2分鐘，然后高速離心12000r/min,2min,取上清液置4℃冰箱中保存。

PPO酶活性測定：1.在小試管中依次加入0.02M鄰苯二酚溶液1.5ml,0.05M pH6.8磷酸緩沖液1.5ml，酶液0.01ml。另取一小試管，不加酶液，作為對照。在30℃下反應2min,398nm波長下測OD 值。

POD酶液提?。悍Q取葉片1g，加20mmol/ KH₂PO₄ 5ml,液氮研磨，以4000r/min離心15min，收集上清液保存在冷處，所得殘渣再用5ml KH₂PO₄溶液提取一次，合并兩次上清保存于4℃冰箱中。

POD酶活性測定：取光徑1cm的比色杯2只，于一只中加入反應混合液2.4ml，KH₂PO₄ 0.6ml，作為校零對照，另一只加入反應混合液2.4ml，提取保存的酶液0.6ml，470nm波長下測OD 值。重復三次。反應混合液：100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0）50ml，加入愈創(chuàng)木酚28μl與磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入30%H₂O₂19μl，混合均勻，保存于4℃冰箱中。

2 結(jié)果與分析

2.1“沃豐素”和“靚果安”對獼猴桃葉片PPO 和POD 活性的影響

處理組和預防組獼猴桃葉片的PPO 活性均于第4 天達到最高值，之后開始逐漸降低；從PPO 相對值來看, 經(jīng)過沃豐素和靚果安處理后，獼猴桃葉片PPO酶活性均高于健康對照和發(fā)病對照，而預防組PPO酶活性均表現(xiàn)為最高，獼猴桃抗病性可能更好。

對于POD 而言, 第1 天各處理葉片的POD 活性水平相差不大, 之后預防組葉片的POD 活性一直在升高, 至第7 天達到最高值, 之后有所下降; 治療組葉片的POD 活性在第2天達到最低，之后又緩慢上升，9天內(nèi)變化很小，幾乎均保持在同一水平。從POD 相對值來看, 經(jīng)過沃豐素和靚果安處理后，第2天之后獼猴桃葉片POD酶活性均高于健康對照和發(fā)病對照，而預防組POD酶活性最高。

3 討論

POD 直接參與細胞壁的木質(zhì)化和角質(zhì)化、生長素代謝、受傷組織的栓化愈合及對病原的防御。PPO 是含銅離子的酶, 當細胞受輕微破壞時某些細胞結(jié)構(gòu)解體, PPO 與底物接觸發(fā)生反應, 將酚氧化成棕褐色的醌, 醌則對病原菌有毒殺作用。本研究結(jié)果表明, 經(jīng)過沃豐素和靚果安處理后, 均能提高獼猴桃葉片中PPO 和POD 的活性, 而PPO 和POD 與植物的抗性密切相關(guān), 說明經(jīng)過沃豐素和靚果安處理后可以提高獼猴桃抗?jié)儾〉哪芰Α?/span>

沃豐素和靚果安屬中藥制劑, 對動物低毒,對作物無毒副作用, 可以用于綠色、無公害農(nóng)作物與園藝作物的生產(chǎn)。該藥物在防治獼猴桃潰瘍病的生產(chǎn)試驗中初步取得了良好效果。建議生產(chǎn)上對潰瘍病以預防為主，本研究結(jié)果顯示, 沃豐素和靚果安在防治獼猴桃潰瘍病中有很大的應用潛力。




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