4．注意事項(xiàng)

　　1.　在具備高質(zhì)量HRP的條件下，所要標(biāo)記的抗1體也要活性高，效價(jià)高(最1低1∶16)，純度高，親和力好，這是保證標(biāo)記物效價(jià)高，免疫活性好的首要條件。' i! t$ {2 f0 g8 |

　　2.　所使用試劑的PH和濃度及用量必須嚴(yán)格掌握。所用試劑，最1好(或必需)新鮮配制。如在戊二1醛標(biāo)記法中所用戊二1醛應(yīng)為新鮮純品，因戊二1醛儲(chǔ)存過久可形成縮和體(雜質(zhì))。否則，影響標(biāo)記效果。3 e0 t3 r9 d/ K+ H9 O; J l

　　3.　室溫?cái)嚢钑r(shí)須避光，室內(nèi)溫度一般在25℃為宜。標(biāo)記物每次透析前，須認(rèn)真檢查，防止漏液。

　　4.　濃的標(biāo)記物相當(dāng)穩(wěn)定，常加入30～40％甘油于-10℃下保存。4℃可保存1～2年，但稀釋成1∶10，只能保存數(shù)周。已配制的使用液應(yīng)在12小時(shí)內(nèi)用完。切忌反復(fù)凍融。

?(5) 加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時(shí)。+ ﹨0 Y( I* K3 j# M+ ]

? ? ? (6) 在攪拌下逐滴加入等體積飽和酸銨，置4℃1小時(shí)。

? (7) 3000rpm離心半小時(shí)，棄上清。沉淀物用半飽和酸銨洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。6 s* w9 j ?F' v4 N9 R- A+ ~

? ? ? (8) 將上述溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析，去除銨離子后(用氏試劑檢測(cè))，大鼠elisa試劑盒生產(chǎn)，10，000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，分裝后，冰凍保存。

3）結(jié)果判定：5 l5 y# N% b0 A* V' T2 w5 b. ﹨) B

? ? ? (1) 定性及效價(jià)滴定：用特異性抗原(或抗1體)同酶標(biāo)記抗1體(或抗免疫球蛋白抗1體)作雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或免疫電泳試驗(yàn)。然后用酶的底物使沉淀弧顯色，可初步鑒定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里)對(duì)酶結(jié)合物進(jìn)行滴定( 見本節(jié) (三)工作濃度的選擇)。

?(1) 稱取5mgHRP溶解于1ml蒸餾水中。1 U0 |) i L/ Y/ ?. ]

? ? ? (2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室溫下避光攪拌20分鐘。: |+ }% L' N7 ?4 e2 g

? ? ? (3) 將上述溶液裝入透析袋中，對(duì)1mM PH4.4的醋1酸緩沖液透析，4℃過夜。

? (4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5，然后立即加入10mg IgG(抗1體，或SPA5mg)在1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攪拌2小時(shí)。9 U# ^& ~. [7 @

? ? ? (5) 加0.1ml新配的4mg／ml NaBH4液，混勻，再置4℃2小時(shí)。# B+ T' n; v7 C' F* H5 }

? ? ? (6) 將上述液裝入透析袋中，對(duì)0.15M PH7.4 PBS透析，4℃過夜。0 m# a# G5 V# x， S7 p， B

　　其余步驟(純化)同戊二1醛標(biāo)記步驟的(6)、(7)、(8)。

3）結(jié)果判定：

　　除標(biāo)記物IgG量的計(jì)算，略有不同以外，其余均同戊二1醛法。5 {% ^% U/ T ?X- Z0 U- a

　　IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62( Q: p$ f' X， F0 }; s

4）試劑及器材:1 x- R+ T/ e$ i' Q

? ? ? (1) 0.1M NaIO4：稱取241mg高碘1酸(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)830602)溶于蒸餾水10ml中。

? (2) 1mM PH4.4醋1酸緩沖液: ??. p' ﹨5 N) ?( K

　　 ? ?0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml+ r% g; o& m2 r7 t4 O

　　 ? ?0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

　 ? ?　加蒸餾水至2，000ml。

? (3) 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液:3 ?! ﹨$ z* p7 ]' g& X. E) z( f

　　　　　　　Na２CO３ 0.32克; s3 C. i! A5 q1 G/ w4 {

　　　　　　　NaHCO３ 0.586克: H% E ?M! O w- M

　　　　　　　加蒸餾水至50ml

　　再用蒸餾水作20倍稀釋，即成0.01M PH9.5的碳酸鹽緩沖液。

? (4) NaBH４溶液(4mg／ml):

　　臨用時(shí)稱取NaBH４4mg溶于1ml蒸餾水中。+ h( i* [6 J， H% T

? ? ? (5) 其它的試劑及器材可參見戊二1醛標(biāo)記法。

武漢默沙克生物科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免1疫學(xué)試劑盒、生化試劑、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免1疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。企業(yè)擁有一支由檢驗(yàn)、生命科學(xué)、化工等專業(yè)人才組成的集研發(fā)生產(chǎn)、銷售管理和技術(shù)服務(wù)于一體的核心團(tuán)隊(duì)，建立了完善的研發(fā)系統(tǒng)和生產(chǎn)設(shè)備，并與知名高校、研究機(jī)構(gòu)、重點(diǎn)企業(yè)等建立戰(zhàn)略合作關(guān)系。企業(yè)研發(fā)生產(chǎn)的產(chǎn)品在免1疫、分子生物等多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，以過硬的質(zhì)量、合理的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)為不同客戶提供最1專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室配備解決方案與售后服務(wù)，受到了市場(chǎng)的認(rèn)可與歡迎，贏得了良好的信譽(yù)和口碑。企業(yè)理念：誠信為本、品質(zhì)至上；創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)、合作共贏。本公司所有產(chǎn)品僅用于實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途