人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱	Applied Cell?人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基
貨    號	AC-1001015
規(guī)    格	500mL
運輸保存條件	基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20--80℃
使用范圍	人真皮/肺/心臟等多種組織器官來源成纖維細胞培養(yǎng)
保質(zhì)期	12個月
產(chǎn)品簡介
人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款適用于人成纖維細胞培養(yǎng)的無動物源細胞培養(yǎng)產(chǎn)品。本產(chǎn)品應(yīng)用人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源成纖維細胞原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)，且不含動物血清，內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)（<0.06EU/mL）。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。
產(chǎn)品特性
?無外源動物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險。
?全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。
?可用于原代分離。
?內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠低于中國藥典水平。
組分	規(guī)格	數(shù)量	運輸
人成纖維細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基
	450mL	1瓶	冰袋
人成纖維細胞添加劑	50mL	1瓶	干冰
產(chǎn)品內(nèi)容
相關(guān)產(chǎn)品
人真皮成纖維細胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001005）
Serum-Free細胞凍存液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001006）
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操作方法
人成纖維細胞培養(yǎng)基配制
1.137℃快速解凍人成纖維細胞培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)，時間大致為10min。待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。
1.2將添加劑以10%比例加入到人成纖維細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人成纖維細胞培養(yǎng)基（AC-1001015）?；旌虾笈囵B(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。
1.3人成纖維細胞培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源的成纖維細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)。

操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
人成纖維細胞復(fù)蘇(10cm dish)
2.1  從液氮或-80℃冰箱中取出凍存的人成纖維細胞，迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2	在生物安全柜或超凈臺中，將解凍后的細胞懸液緩慢加入5 mL預(yù)溫的人成纖維細胞培養(yǎng)基（AC-1001015）。
2.3	1000rpm 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纖維細胞培養(yǎng)基重懸細胞。
2.4	將細胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動培養(yǎng)皿使細胞均勻分布，5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后觀察細胞狀態(tài)。
2.5	24h后更換新鮮人成纖維細胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液。
人成纖維細胞傳代培養(yǎng)
1.	在顯微鏡下觀察細胞，當(dāng)細胞融合度達到90%，即可傳代。
2.	在超凈臺/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。
3.	室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
4.	加入消化液2倍體積的人成纖維細胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。
5.	將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。
6.	棄上清，加入人成纖維細胞培養(yǎng)基，重懸細胞，計數(shù)。1：2-1：4比例傳代，或按2-5x104 cells/cm2  傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：人成纖維增殖情況與細胞密度密切相關(guān)，所以傳代時細胞密度不宜過稀。
人成纖維細胞凍存
1.  細胞達到90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS清洗一次。
2.	加入Xeno-Free細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
3.	加入消化液2倍體積的人成纖維細胞培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。
4.   將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。
5.	加入適量Serum-free細胞凍存液（AC-1001006），調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。
6.	直接放入-80℃，24h后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。

質(zhì)量控制
檢驗項目
Test Catagories	參考數(shù)據(jù)
Reference Data	結(jié)果
The results 
外觀
Physical APPearance	橙紅色液體
Orange-red liquid	符合規(guī)定
Conform to the provisions
澄清度
Clarity	澄清
Clear	符合規(guī)定
Conform to the provisions
pH值
Ph value	6.9-7.3	符合規(guī)定
Conform to the provisions
滲透壓
Osmolality	270-340
（mosm/KgH2O）	符合規(guī)定
Conform to the provisions
細菌內(nèi)毒素
Endotoxin	小于0.06 EU/ml	符合規(guī)定
Conform to the provisions
無菌
Sterility	無菌
Sterility	符合規(guī)定
Conform to the provisions
支原體
Mycoplasma	0.11um過濾，支原體試驗為陰性
The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration	符合規(guī)定
Conform to the provisions

 上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進行嚴格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團隊還可為您提供及時有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學(xué)問題和解決方案。最終我們希望通過高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)，不斷推動細胞治療、再生醫(yī)學(xué)以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應(yīng)用領(lǐng)域的忠誠合作伙伴。

公司愿景:　
我們努力成為中國細胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務(wù)提供商。

公司使命:  
我們致力于生命科學(xué)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化，為基礎(chǔ)研究、細胞治療、再生醫(yī)學(xué)以及藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域提供高品質(zhì)、高性價比的產(chǎn)品與服務(wù)。