新生大鼠原代心肌細胞分離試劑盒
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱	Applied Cell?大鼠原代心肌細胞分離試劑盒
貨    號	AC-1002017
保存條件	詳見產(chǎn)品內(nèi)容
使用范圍	大鼠原代心肌細胞分離培養(yǎng)
保質(zhì)期	12個月

產(chǎn)品簡介
大鼠原代心肌細胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）開發(fā)的一款用于新生大鼠心臟原代心肌細胞分離和培養(yǎng)的高效試劑盒。在細胞分離中，充分優(yōu)化分離過程以及培養(yǎng)試劑，可獲得高純度、高活性的原代心肌細胞。	
產(chǎn)品特性
?高效分離原代心肌細胞，產(chǎn)量提高1.5-4倍。
?可分離得到高純度、高活性心肌細胞。
產(chǎn)品內(nèi)容
試劑	規(guī)格	數(shù)量	保存	運輸
Wash buffer	125ml	2瓶	2-8℃	冰袋
Rat Cardiomyocytes Culture Medium	125ml	2瓶	2-8℃	冰袋
Ready-to-use GelⅠ	100ml	1瓶	2-8℃	冰袋
Ready-to-use Gel Ⅱ	100ml	1瓶	2-8℃	冰袋
Rat Cell Dissociation Solution	125ml	1瓶	-20℃保存	干冰

相關(guān)產(chǎn)品
大鼠心肌細胞維持培養(yǎng)基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001036） 
實驗準備
A.使用75%酒精擦拭試驗臺；
B.準備酒精燈、酒精棉及用于盛放實驗處理后大鼠的垃圾袋；
C.剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進行滅菌處理；
D.吸取適量Wash Buffer至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細胞房內(nèi)操作）。
注意：細胞房和超凈工作臺需提前進行紫外滅菌處理；培養(yǎng)皿大小的選擇取決于實
驗時所取心臟的數(shù)目，Wash Buffer一直放于冰上保持低溫。
E.Rat Cell Dissociation Solution在4℃融化，分裝，放-20℃長期保存，不要反復凍存。
F.培養(yǎng)板用Ready-to-use GelⅠ提前60min包被。（6孔板：1ml/孔；10cm dish:7ml/孔）
操作方法
1.取心臟
A.左手捏住大鼠背部皮膚，使用酒精棉（75%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有預冷Wash buffer的培養(yǎng)皿中。
B.在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。
2.組織清洗：經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細胞房超凈工作臺，用預冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，將心臟剪成約1mm3的組織塊，再清洗2次。
3.預消化
加入1-3ml Rat Cell Dissociation Solution ，37℃水浴中搖動，消化1min后棄上清。
4.消化
A.在50ml離心管中加入5ml Rat Cell Dissociation Solution，37℃水浴中搖動消化7min后將上清液加入預冷的5ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均勻并置于冰上，保持低溫。
注意：每次Rat Cell Dissociation Solution使用的量可根據(jù)組織塊的多少進行調(diào)整。
B. 重復4.A的步驟直至組織完全消化。
注意：吸取上清時盡量避免吸出沉淀。
C.將收集的上清在室溫下1260rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用Rat Cardiomyocytes Culture Medium重懸細胞。
5.差速貼壁：
細胞通過70um/100μm濾網(wǎng)過濾，并通過以下方式進行差速貼壁，
A、直接接種到培養(yǎng)板中；
B、接種到使用Ready-to-use GelⅠ包被培養(yǎng)板上；
A、B選擇一種方法進行差速貼壁即可，放入細胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）中孵育60min-90min，進行差速貼壁；
此時，使用Ready-to-use GelⅡ 包被培養(yǎng)板，以備后續(xù)細胞鋪板使用。
注意：孵育時間根據(jù)不同品牌培養(yǎng)板貼壁能力不同，貼壁時間可以做出適當調(diào)整。因為不同品牌培養(yǎng)板貼壁能力不同，B選項進行包被，可以提高細胞貼壁比例。
6.細胞鋪板：
取出差速貼壁培養(yǎng)皿，將上清細胞懸液移入15ml離心管中，1260rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預先加熱至37℃的1-2ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium重懸細胞。利用血細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù)，用臺盼藍檢測細胞存活率。根據(jù)所計的細胞數(shù)使用Rat Cardiomyocytes Culture Medium進行稀釋調(diào)整細胞濃度，將細胞移至預先使用Ready-to-use GelⅡ包被好的培養(yǎng)皿/板中。
7.觀察
將培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察細胞狀態(tài)，若細胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進行后續(xù)實驗。

 上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標準化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進行嚴格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團隊還可為您提供及時有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學問題和解決方案。最終我們希望通過高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務，不斷推動細胞治療、再生醫(yī)學以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應用領(lǐng)域的忠誠合作伙伴。

公司愿景:　
我們努力成為中國細胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務提供商。

公司使命:  
我們致力于生命科學技術(shù)產(chǎn)業(yè)化，為基礎(chǔ)研究、細胞治療、再生醫(yī)學以及藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域提供高品質(zhì)、高性價比的產(chǎn)品與服務。