13、檢測前，要打開酶1標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

　　14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

　　15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。

　　16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

　　17、應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

　　18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。

　　二、下面所提到的是針對我公司的ELISA產(chǎn)品會出現(xiàn)的問題及解決辦法

　　1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

　　a.原因：未加入酶標(biāo)記物。

　　解決辦法：請按照操作步驟進(jìn)行。

　　b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

　　解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

　　c.原因：室溫太低。

　　解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當(dāng)延長溫育時間。

　　d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

　　解決辦法： 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

　　e.原因：試劑盒已過有效期限。

　　解決辦法：請更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

3．工作濃度的選擇

　　在*酶技術(shù)中，首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因為酶標(biāo)記物濃度的很小變化，便可導(dǎo)致試驗結(jié)果產(chǎn)生很大的波動。另外，豬elisa試劑盒，由于濃度過高，可使非特異性反應(yīng)增加，而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此，正式試驗前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。

　　酶標(biāo)記抗1體的滴定方法是：將抗原(或抗1體)物理吸附于固相載體上，然后將經(jīng)過一系列稀釋的酶標(biāo)抗1體(或抗Ig抗1體)與吸附在載體上的抗原(或抗1體)起反應(yīng)，以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來確定酶標(biāo)記抗1體的效價，或稱工作濃度。

（1）戊二1醛二步法) M ?~0 L+ l# k! D

1） 原理：戊二1醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和*球蛋白上的氨基共價結(jié)合，形成酶-戊二1醛-*球蛋白結(jié)合物。6 C， Q8 j& r' m

2）標(biāo)記步驟：

? (1) 稱取HRP25mg溶于1.25％戊二1醛溶液中，于室溫靜置過夜。5 k* k) F9 F5 V% ﹨

? ? ? (2) 反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml／1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。: e6 V. j! |， b8 _

? ? ? (3) 將待標(biāo)記的抗1體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。

? (4) 用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續(xù)攪拌3?小時。

武漢默沙克生物科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免1疫學(xué)試劑盒、生化試劑、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免1疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。企業(yè)擁有一支由檢驗、生命科學(xué)、化工等專業(yè)人才組成的集研發(fā)生產(chǎn)、銷售管理和技術(shù)服務(wù)于一體的**團(tuán)隊，建立了完善的研發(fā)系統(tǒng)和生產(chǎn)設(shè)備，并與**高校、研究機構(gòu)、重點企業(yè)等建立戰(zhàn)略合作關(guān)系。企業(yè)研發(fā)生產(chǎn)的產(chǎn)品在免1疫、分子生物等多個領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，以過硬的質(zhì)量、合理的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)為不同客戶提供較1專業(yè)的實驗室配備解決方案與售后服務(wù)，受到了市場的認(rèn)可與歡迎，贏得了良好的信譽和口碑。企業(yè)理念：誠信為本、品質(zhì)至上；創(chuàng)新驅(qū)動、合作共贏。本公司所有產(chǎn)品僅用于實驗室科研及非臨床用途