計數方法適用性試驗中，采用平皿法或薄膜過濾法時，試驗組菌落數減去供試品對照組菌落數的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.5～2范圍內；采用MPN法時，試驗組菌數應在菌液對照組菌數的95%置信限內。若各試驗菌的回收試驗均符合要求，照所用的供試液制備方法及計數方法進行該供試品的需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數計數。

? ?方法適用性確認時，若采用上述方法還存在一株或多株試驗菌的回收達不到要求，那么選擇回收最接近要求的方法和試驗條件進行供試品的檢查。

? ?供試品檢查

? ?檢驗量

? ?檢驗量即一次試驗所用的供試品量（g、ml或c㎡）。

? ?一般應隨機抽取不少于2個zui小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進行檢驗。

? ?除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。檢驗時，應從2個以上zui小包裝單位中抽取供試品，微生物檢測，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。

? ?供試品的檢查

? ?按計數方法適用性試驗確認的計數方法進行供試品中需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數的測定。

? ?胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數。

? ?陰性對照試驗 以稀釋液代替供試液進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應無菌生長，如果陰性對照有菌生長，應進行偏差調査。

4、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重復移種便可以得到純的寄生菌。

5、厭氧法

在實驗室中，微生物檢測機構，為了分離某些yanyangjun，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器，把這支試管放在沸水0浴中加熱數分鐘，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻，微生物檢測，并進行接種。接種后，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，食品微生物檢測方法，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是，在接種后，利用n2或co2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些yanyangjun，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。

6、單細胞(或單孢子)分離法

是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。較大的微生物，可采用毛細管提取單個個體。個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細管或顯微zhen、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。單細胞分離法對操作技術有比較高的要求。

2.接種和稀釋

? ?按下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。為確認供試品中的微生物能被充分檢出，首先應選擇zui低稀釋級的供試液進行計數方法適用性試驗。

? ?（1）試驗組 取上述制備好的供試液，加入試驗菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。

? ?（2）供試品對照組 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗組操作。

? ?（3）菌液對照組取 不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液，按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。

? ?若因供試品抗jun活性或溶解性較差的原因導致無法選擇zui低稀釋級的供試液進行方法適用性試驗時，應采用適宜的方法對供試液進行進一步的處理。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消除，供試液可經過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適用性試驗。

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