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    武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專(zhuān)門(mén)從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免1疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免1疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。



    1. 在無(wú)抗1生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

    ? ? 2. 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),IgA ELISA試劑盒,把選擇抗1生素加入到每一個(gè)孔中。例如,兩1性霉1素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    3. 每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。 ?

    4. 確定抗1生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗1生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2~3代。



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    當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi),用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),檢查HEPA過(guò)濾器。 高濃度的抗1生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗1生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗1生素如兩1性霉1素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是我司推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟:


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    3、染色弱 原因 解決辦法 抗1體濃度過(guò)低,孵育時(shí)間過(guò)短 提高抗1體濃度,孵育時(shí)間不能少于60分鐘 試劑超過(guò)有效使用期 及時(shí)更換試劑 操作中,滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干,致 使試劑稀釋 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥) 室溫太低,低于15℃ 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰 箱過(guò)夜) 蛋白封閉過(guò)度 封閉時(shí)間不要超過(guò)10分鐘 4、染色陰性 原因 解決辦法 操作步驟錯(cuò)誤 重新試驗(yàn),設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照 組織中無(wú)抗原 設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照片,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無(wú)誤


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