培養(yǎng)基的制備

1.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

?胰酪胨17.0克

氯化鈉5.0克

大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克

磷酸氫二鉀2.5克

葡萄糖（一水合）2.5克

水1000mL

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置 20～25℃培養(yǎng)。

2. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

胰酪胨15.0克

氯化鈉5.0克

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克

瓊脂15.0克

水1000ml

除瓊脂外，取上述成分，混合。微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，微生物限度檢查法，搖勻，分裝，滅菌。

3.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基照微生物限度檢查法（附錄ⅩⅢ C）制備。

含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物(mixed culture)。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)(pureculture)。在進(jìn)行junzhong鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化，方法有許多種。

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，微生物限度檢驗(yàn)儀，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，微生物限度試驗(yàn)，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。

2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃guadao把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，微生物限度，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個(gè)菌落。

3、平板劃線法

zui簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、fangshe法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個(gè)細(xì)胞長成一個(gè)菌落。

? ?各品種項(xiàng)下規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：

? ?10^1cfu：可接受的zui大菌數(shù)為20；

? ?10^2cfu：可接受的zui大菌數(shù)為200；

? ?10^3cfu：可接受的zui大菌數(shù)為2000，依此類推。

? ?若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結(jié)果均符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。

? ?稀釋液、沖洗液及培養(yǎng)基

? ?見非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法（通則1106）。

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