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    洋蔥亞細胞定位-武漢思特進(在線咨詢)

  • 作者:武漢思特進科技發(fā)展有限公司 2019-12-15 19:33 580
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    武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。




    由稻瘟菌(Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病是重要的水稻病害之一。以研究稻瘟菌致病基因為中心,探討致病相關基因的種類及其功能,生理小種和致病基因的關系,致病基因的遺傳分離和在群體中的轉(zhuǎn)移規(guī)律等等,能夠為水稻抗瘟性研究和稻瘟病化學防治、生物防治提供理論基礎。 本研究利用在實驗室已經(jīng)建成的根癌農(nóng)介導的稻瘟菌T-DNA插入突變體庫,挑選了7個致病力缺陷的突變體,提取基因組DNA,PCR檢測確認T-DNA的插入。利用DW-ACP-PCR(DNA Walking-Annealing Control Primer-PCR)技術對T-DNA右邊界側(cè)翼序列進行擴增,7個突變體都獲得了特異條帶。對這些特異條帶進行并測序,其中5個測序成功,另外2個測序失敗。將成功的序列與稻瘟菌基因組和NCBI數(shù)據(jù)庫比對,發(fā)現(xiàn)1個為載體pCAMBIA1300序列,4個與稻瘟菌的基因組相似性達93%~99%,認為是T-DNA插入位點的側(cè)翼序列。

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    CaNZ是CaN(Calcineurin)基因的正義表達基因,是在真核生物中存在的一個Ca2+及CaM依賴的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它包括一個催化亞基calcineurin A和一個Ca2+結(jié)合亞基calcineurin B,其催化亞基calcineurin A活性受CaM調(diào)節(jié)。本實驗在篩選高效再生體系基礎上,利用帶有信號肽和CaM結(jié)合肽的載體,以農(nóng)為媒介將CaN基因?qū)胫?,預期過表達的融合蛋白將會被分泌到細胞外并與質(zhì)外體CaM相結(jié)合,抑制質(zhì)外體CaM的功能,從而構(gòu)建出質(zhì)外體CaM的反義植株,洋蔥亞細胞定位,觀察質(zhì)外體CaM反義植株的表型改變,為進一步開展CaM在植物生長發(fā)育過程中的功能研究提供基礎。 研究結(jié)果如下: (1)以14-16d葉片為外植體,以MS為基本培養(yǎng)基,通過附加配方對比,篩選出適合材料再生的培養(yǎng)基配方:MS+IAA 0.5mg·L-1+6-BA 1.5mg·L-1為芽分化的培養(yǎng)基,1/2MS+NAA0.1mg·L-1為生根培養(yǎng)基。 (2)用Kan進行葉片抗性篩選。當Kan濃度小于50mg·L-1時,葉片能正常分化出芽;當Kan濃度為75mg·L-1時,葉片大多數(shù)白化;當Kan濃度超過100mg·L-1時,芽分化停止。所以,以Kan濃度100mg·L-1為葉片分化芽抗性篩選的臨界濃度;而培養(yǎng)物根對較為敏感,Kan 50mg·L-1為篩選臨界值。


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    植物中,WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員眾多,近年來成為植物分子生物學研究的熱點。由于其編碼蛋白的N-端具有高度保守的WRKYGQK氨基酸殘基序列,人們將其命名為WRKY。其保守的WRKY結(jié)構(gòu)域能與下游基因啟動子W-box特異性結(jié)合,從而調(diào)控下游基因的表達水平。目前,諸多研究結(jié)果表明,WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物中參與生物脅迫、非生物脅迫、種子發(fā)育、種子休眠與萌芽、形態(tài)建成、衰老等方面的表達調(diào)控。 前人研究表明,擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AtWRKY70的表達水平受水楊酸誘導,與該信號途徑當中的抗病反應相關聯(lián)。與野生型相比,超量表達AtWRKY70的擬南芥植株對青花菜褐莖病(Hyaloperonospora parasitica)、假單胞菌(Pseudomonas syringae)等真菌病表現(xiàn)出了更強的抗性,而對歐文氏軟腐菌(Erwinia amylovora)等細菌病則更敏感。同時發(fā)現(xiàn),AtWRKY70對植物的衰老起負調(diào)控作用。序列對比分析表明,在楊樹當中,PtWRKY89與AtWRKY70高度同源,然而,對于PtWRKY89生物學功能的研究至今尚未報道。本中,我們首先了PtWRKY89基因,并對其進行了組織表達分析及亞細胞定位,進一步構(gòu)建載體轉(zhuǎn)化毛白楊,在轉(zhuǎn)基因植株中分析了該轉(zhuǎn)錄因子在病害脅迫生理過程中的調(diào)控作用。

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    相關產(chǎn)品:動植物,細菌,細胞生物實驗
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