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    病毒滅活試驗(yàn)是利用某種有代表性的活病毒及其細(xì)胞感染技術(shù),評(píng)價(jià)各種消毒因子的病毒殺滅效果,驗(yàn)證消毒因子的病毒滅活能力。
    病毒培育與滅活實(shí)驗(yàn):
    1、實(shí)驗(yàn)材料:
    實(shí)驗(yàn)用病毒株,宿主細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)瓶與 96 孔培養(yǎng)板,恒溫水 浴箱,二氧化碳培養(yǎng)箱,層流超凈工作臺(tái),-80℃低溫箱,二氧化碳培養(yǎng)箱,液氮,離心設(shè)備,移液器,細(xì)胞維持培養(yǎng)基,細(xì)胞完全培養(yǎng)基,去離子水等。
    2、實(shí)驗(yàn)過程:
    病毒懸液制備:實(shí)驗(yàn)組,陽性對(duì)照組,陰性對(duì)照組。病毒培育需每日觀察細(xì)胞與宿主細(xì)胞生長(zhǎng)情況,接種細(xì)胞,病變收獲病毒, 每組按照特定條件設(shè)置病毒滅殺實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,并每組進(jìn)行噬斑病毒感染滴度測(cè)定。平均滅活對(duì)數(shù)值計(jì)算,評(píng)價(jià)。
    汕頭病毒抑制性能測(cè)試單位
    病毒滅活效果測(cè)試:
    主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù),評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。
    試驗(yàn)器材:
    (1)試驗(yàn)用病毒株:脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(poliovirus- I,PV-I )株;艾滋病病毒1型(HIV-1)美國株。
    (2)宿主細(xì)胞:可采用VERO細(xì)胞系、BGM細(xì)胞、Hela細(xì)胞系或FL細(xì)胞系,作為PV-1的測(cè)試細(xì)胞。用含有人T淋巴細(xì)胞白血病病毒1型(human T cell leukemiavirus 1, HTLV-1) 基因的人淋巴細(xì)胞(株)作為HIV-1的測(cè)試細(xì)胞。
    (3)細(xì)胞培養(yǎng)瓶與96孔培養(yǎng)板。
    (4)恒溫水浴箱等。
    汕頭病毒抑制性能測(cè)試單位
    病毒滅活試驗(yàn)病毒懸液的制備:
    1、從液氮中取出凍存的試驗(yàn)用宿主細(xì)胞,在37°C溫水中迅速融化,用毛細(xì)吸管移植于含有細(xì)胞維持液的細(xì)胞管內(nèi),吹吸數(shù)次,使混勻,立即離心(3000r/min, 3min) ,去上清液。再加入適當(dāng)?shù)募?xì)胞維持液,吹吸數(shù)次,使混勻,同上離心后,轉(zhuǎn)種于加有10完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,在細(xì)胞長(zhǎng)滿單層時(shí),用于消毒試驗(yàn)。
    2、取出低溫凍存的試驗(yàn)病毒毒種,37°C水浴融化,用細(xì)胞維持液作10倍稀釋,然后接種于已經(jīng)長(zhǎng)滿單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶?jī)?nèi),置37°C溫箱中,使與細(xì)胞吸附、生長(zhǎng)。逐日觀察病變,待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí),收獲病毒。
    3、將含有病毒及宿主細(xì)胞的培養(yǎng)液,在冰浴條件下,用超聲波(或反復(fù)凍融)破碎宿主細(xì)胞,釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要為細(xì)胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。按每管1. 0分裝于無菌離心管(1.5)中。
    4、取1支病毒懸液,按病毒滴度測(cè)定法,測(cè)定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80°C備用。
    汕頭病毒抑制性能測(cè)試單位
    病毒滅活效果測(cè)試:
    主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù),評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。病毒殺滅效果試驗(yàn),主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù),評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。
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