產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
試劑盒采用酶法破碎酵母細(xì)胞壁和堿裂解法裂解酵母細(xì)胞來提取酵母質(zhì)粒DNA。所采用的酵母破壁酶能有效地破壞酵母細(xì)胞壁，提高酵母質(zhì)粒DNA 的產(chǎn)量。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。使用本試劑盒提取的酵母質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無需使用、等有毒試劑，操作安全。
使用說明:
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。溶液YP1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、取1-5ml酵母培養(yǎng)物（不超過 5×107cells），12000rpm離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。

2、酵母細(xì)胞壁的破除：

A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β-巰基，充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀中加入 250ul 溶液 YP1（請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul 溶液 YP1（請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。加入 150-200ul酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡(jiǎn)短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失，請(qǐng)用溶液 YP1 補(bǔ)足至 250ul）于另一干凈離心管中。

3、向離心管中加入 250ul溶液 YP2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細(xì)菌基因組 DNA，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時(shí)間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。

4、向離心管中加入 350ul溶液 YP3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心 10 min，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液 YP3 加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 2min，12000rpm離心 1min。

10、為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min， 12000rpm離心 1min。 

*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！

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