鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因elisa受體試劑盒
- 作者:廣銳(上海)酶聯(lián)免疫技術(shù) 2016-05-19 17:58 2960
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鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因elisa受體試劑盒
elisa指標(biāo):人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒
elisa kit:Human Vascular Endothelial cell Growth Factor (VEGF)ELISA Kit.
elisa規(guī)格:96T/48T【可拆缷酶標(biāo)板】
elisa質(zhì)量:elisa試劑盒100%廠家供貨,保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,可靠性,歡迎來(lái)電訂購(gòu)!
【人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒】操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在第一、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為900pg/ml,600pg/ml ,300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣
品最終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30(48T 的20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T 的20 倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF),再與HRP 標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)濃度。
人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)elisa試劑盒目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,骨髓及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的含量。
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