僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

                       人乙肝核心抗體（HBcAb）定量檢測試劑盒（ELISA）說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：人乙肝核心抗體（HBcAb）定量檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱：Human hepatitis B virus core antibody（HBcAb） ELISA KIT

【包裝規(guī)格】
48人份/盒，96人份/盒

【預(yù)期用途】
僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中人乙肝核心抗體（HBcAb）的濃度。


【檢驗原理】
本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預(yù)包被抗人乙肝核心抗體（HBcAb）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入人乙肝核心抗體（HBcAb）校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的人乙肝核心抗體（HBcAb）抗原（酶標抗原），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人乙肝核心抗體（HBcAb）的濃度負相關(guān)。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中人乙肝核心抗體（HBcAb）的濃度。



【主要組成成分】
主要成分
組分	數(shù)量	主要成分
校準品	0.5ml/管*6管	抗原配制的6個濃度標準品
包被微孔板	96T	預(yù)包被固相抗體
HRP標記抗體	6mL	HRP標記的檢測抗體
底物液A	6mL	過氧化脲工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
20×濃縮洗滌液	30mL	含0.15%Tween20的PBS
說明書	1份	--
自封袋	1個	--
不干膠	2片	--
校準品濃度依次為：32、16、8、4、2、0 NU/ml。校準品已經(jīng)通過測試，結(jié)果表明HBs抗原陰性，HIV1、HIV2和HCV抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應(yīng)當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材
  1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、質(zhì)控品（可從藍圖生物科技產(chǎn)品研發(fā)系統(tǒng)中選擇）

【儲存條件及有效期】
  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】
  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。

【樣本要求】
  樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。

樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。
8、如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。

【檢驗結(jié)果的解釋】
檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
校準品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小于0.3NU/ml。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組人乙肝核心抗體（HBcAb），與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
7、穩(wěn)定性
    2℃-8℃保存，有效期6個月。

泉州市藍圖生物科技有限公司，是一家專業(yè)的免疫試劑生產(chǎn)廠家，主要經(jīng)營生物活性原材料、酶聯(lián)免疫試劑盒、化學發(fā)光試劑盒，原料產(chǎn)品主要用于體外診斷試劑盒的生產(chǎn)，試劑盒主要用于生物醫(yī)藥臨床研究、動物疫病檢測、食品安全檢測、免疫效果監(jiān)測等。在此基礎(chǔ)上建立獨立的第三方科研檢測實驗室，為各類科學研究提供有力的檢測技術(shù)支持。
    公司定位于抗原抗體制備及應(yīng)用，以抗原抗體制備為核心，不斷開發(fā)抗原抗體種類，擴大應(yīng)用范圍，形成以活性原料制備為發(fā)動機，具體行業(yè)應(yīng)用為船身，推動整個公司的平穩(wěn)快速發(fā)展。公司目前擁有四個平臺：抗原提取和合成平臺、單/多克隆抗體制備和純化平臺、生物素/酶/膠體金標記平臺、免疫試劑盒生產(chǎn)平臺。產(chǎn)品具體應(yīng)用于免疫比濁、膠體金、ELISA和化學發(fā)光，已在生物醫(yī)藥研究、食品安全、體外診斷、科學研究等領(lǐng)域取得取得不錯的業(yè)績。
  公司成立以來，始終遵循“精益求精”的經(jīng)營宗旨，不斷整合生物行業(yè)特別是免疫行業(yè)上下游技術(shù)的相關(guān)資源，為成為免疫行業(yè)的核心供應(yīng)商和中國最大的抗體生產(chǎn)基地而努力，為中國剛起步的生物科技產(chǎn)業(yè)的進步和社會可持續(xù)發(fā)展而努力。
 
 
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