僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

禽流感H5病毒IgG抗體（AIV）檢測試劑盒（ELISA）
說明書


貨號：INS0030003



    使用前，請務(wù)必仔細(xì)閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術(shù)支持專線，咨詢清楚再進(jìn)行實驗。



【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：禽流感H5病毒IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H5 Virus（ELISA）

【包裝規(guī)格】
48T/盒，96T/盒

【預(yù)期用途】
本試劑用于檢測禽血清中流感H5病毒IgG抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等

【檢驗原理】
  本試劑盒系由預(yù)包被禽流感H5病毒IgG抗體抗原的酶標(biāo)板（固相抗原，貨號：INS0030003C）、抗體工作液（貨號：INS0030003J）、酶標(biāo)記物（酶標(biāo)抗體，貨號：INS0030003E）及其他配套試劑組成，應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測禽血清或血漿中禽流感H5病毒IgG抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有禽流感H5病毒IgG抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感H5病毒IgG抗體。

【主要組成成分】
主要成分
組分	數(shù)量	主要成分
陰性對照	1ml/管	不含待測物的緩沖液
陽性對照	1ml/管	含待測物的緩沖液
包被微孔板	96T	預(yù)包被固相抗原
酶標(biāo)記物	10mL	酶標(biāo)記的檢測抗體
抗體工作液	6mL	抗體緩沖液
底物液A	6mL	工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
終止液	6mL	酸稀釋液
20×濃縮洗滌液	30mL	含0.15%Tween20的PBS
說明書	1份	--
自封袋	1個	--
不干膠	2片	--
稀釋板	1塊	--
陰陽性對照已經(jīng)通過測試，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材
  1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】
  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
  3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為28天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】
  半自動的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】
  樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮做為防腐劑。
1、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
2、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
3、蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。
4、用工作洗滌液將待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫2h，確保充分復(fù)溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，陰性/陽性對照和樣品，建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置陰陽性對照孔、樣本孔，陰陽性對照孔各加對照品50μL，樣本孔加樣本50μL。
5、每孔加抗體工作液50μl，混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機(jī)，請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
7、所有孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記物100μL。
8、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機(jī)，請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 
實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥0.98，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×55%。

【檢驗結(jié)果的解釋】
1.PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100；
2.PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
2、陰性結(jié)果
陰性對照的OD值高于0.98。
3、陽性結(jié)果
陽性對照的OD值低于陰性對照的OD值的55%。
4、特異性
本試劑盒識別天然和重組禽流感H5病毒IgG抗體，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
5、穩(wěn)定性
    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實驗完成后徹底洗手。

技術(shù)提示
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準(zhǔn)品與樣本時，每個校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

廢物處理
  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責(zé)任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進(jìn)行廢物和污物的處理，同時要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。

     黃石市艾恩斯生物科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、分子生物學(xué)試劑等高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。而且，在此基礎(chǔ)上建立獨立的第三方科研檢測實驗室，為各類科學(xué)研究提供有力的檢測技術(shù)支持。
    企業(yè)擁有專業(yè)的人才組成的集研發(fā)生產(chǎn)、銷售管理和技術(shù)服務(wù)于一體的核心團(tuán)隊，建立了完善的研發(fā)系統(tǒng)和生產(chǎn)設(shè)備，并與知名高校、研究機(jī)構(gòu)、重點企業(yè)等建立戰(zhàn)略合作關(guān)系。公司自成立以來，就非常注重企業(yè)信息化的建設(shè)，我們采用了先進(jìn)的內(nèi)部供應(yīng)鏈信息處理平臺，保證客戶訂單的準(zhǔn)確、高效處理。我們的客戶關(guān)系管理系統(tǒng)和客戶關(guān)系管理團(tuán)隊，能第一時間響應(yīng)客戶的售前、售后需求，關(guān)注客戶體驗及滿意度。因為專業(yè)，所以值得信賴。
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