葉酸測定用培養(yǎng)基原理


	正常人的血清葉酸水平正常為9.9ng / ml。在身體異?；虻貌r，葉酸水平會顯著變化。葉酸干酪培養(yǎng)基采用干酪乳桿菌（ATCC 7469）為測定用菌，用于葉酸的微生物法測定。該培養(yǎng)基是基于Flynn等人(1)的配方，并經(jīng)Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于維生素測定的測定菌通常需要三種培養(yǎng)基：維持培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基和測定用培養(yǎng)基。后者通常是化學限定的培養(yǎng)基，包含所有測定菌生長所需的養(yǎng)分，但不含有待測的分子。類似的，葉酸干酪培養(yǎng)基包含干酪乳桿菌生長所需的所有成分，但不包含葉酸。因而，添加一系列濃度增加的葉酸，會觀察到干酪乳桿菌生長反應的遞增。


	


	


	干酪乳桿菌（ATCC 7469）的貯備菌制備是在AOAC推薦的乳桿菌瓊脂（貨號M366）試管穿刺接種培養(yǎng)，35-37°C孵育18-24小時后，威正翔禹生物科技,干酪乳桿菌葉酸測定用培養(yǎng)基怎么樣,上海威正翔禹生物科技有限公司，試管儲存在冰箱里。每月轉接一次。測定菌液的制備是將貯備菌轉種到含10ml微量維生素檢測接種肉湯（貨號M133）或乳酸桿菌肉湯（貨號M367）的試管中。35-37°C孵育24小時后，在無菌條件下菌液離心，棄掉上清，再重懸于10ml的無菌葉酸干酪培養(yǎng)基中（貨號M543）。再像之前一樣沉淀，并清洗一次。最后，清洗后的菌株重懸于10ml葉酸干酪培養(yǎng)基中，威正翔禹生物科技,干酪乳桿菌葉酸測定用培養(yǎng)基怎么樣,上海威正翔禹生物科技有限公司，并用該培養(yǎng)基進行1:100稀釋。1滴重懸液用于接種到每個測定管中。也可用0.85% NaCl代替培養(yǎng)基來清洗和稀釋。


	


	


	由于滅菌條件，孵育溫度等因素會影響標準曲線讀數(shù)，并且每次不會完全一樣，因此每次都應制備標準曲線。10ml管內(nèi)的標準品量為0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1ng。


	


	


	葉酸標準品的制備：將20mg葉酸干粉溶于含有20ml乙醇的100ml蒸餾水中。用0.1N NaOH調(diào)整溶液pH值為10.0，再用0.05N HCl調(diào)pH為 7.0。該溶液含有200g葉酸/ml。用999ml蒸餾水稀釋1ml該溶勹液，則濃度為200ng/ml。再用999ml葉酸緩沖液A（貨號M544）稀釋1ml該溶液，則為0.2ng/ml的葉酸標準溶液。每管取0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5ml該溶液，配置即告完成。


	


	


	血清樣本的保存：讓血液樣本凝固以分離血清。分離血清至干凈干燥的血清管，并離心除去存在的任何血細胞。小心操作，避免出現(xiàn)紅細胞的溶血。分裝血清樣本至于干凈干燥的試管中，每管5ml。每管加入25mg的抗壞血酸。-20°C以下溫度保存。


	


	


	血清樣本的制備：解凍含有抗壞血酸的血清。向5ml樣品中加入45ml葉酸緩沖液A（M544）。孵育37℃90分鐘。然后15磅121℃高壓滅菌2.5分鐘。離心去除凝固的蛋白，將上清液轉移至清潔干燥的管中。該透明溶液即可用作葉酸待測的樣本。


	


	


	樣本葉酸濃度的測定步驟：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他體積的制備好的血清提取物。加入5ml葉酸干酪培養(yǎng)基和足量的蒸餾水，使每個試管的總體積為10ml。15磅121°C滅菌5分鐘。冷卻試管并向每個試管中加入一滴接種液。35-37℃孵育18-24小時后進行濁度讀數(shù)。讀數(shù)前將試管冷藏15-30分鐘以停止細菌生長。620nm檢測吸光度。待測樣品中的葉酸含量應根據(jù)標準曲線來確定，不過要考慮樣品稀釋度。


	


	


	應非常小心，避免培養(yǎng)基和玻璃器具被污染。應使用潔凈的無去污劑的玻璃器具。少量的外源物質(zhì)的污染可能導致錯誤的結果。

	


	葉酸干酪培養(yǎng)基


	


	貨號：M543


	品名：Folic Acid Casei Medium


	規(guī)格：100G干粉


	儲存條件：在8°C下密閉保存，制備好的培養(yǎng)基在2-8°C保存。


	保質(zhì)期：干粉見標簽有凵效期，制備好的培養(yǎng)基建議在一周內(nèi)使用。


	


	

	應用


	葉酸干酪培養(yǎng)基用于葉酸的微生物法測定。干酪乳桿菌（ATCC 7469）為測定用菌。


	


	質(zhì)量控制


	?外觀——米黃色至黃色均一自由流動粉末


	


	?制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀


	


	?配比濃度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.7±0.1


	


	?pH值——6.60-6.80


	


	配置


	


	稱取9.4g干粉培養(yǎng)基溶于100ml蒸餾水，加入50mg抗壞血酸。加熱至沸騰使培養(yǎng)基完全溶解。測定時，分裝至每管為5ml培養(yǎng)基（包含標準品和待測樣品）。加蒸餾水，使總體積達到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻。


	


	培養(yǎng)反應


	采用干酪乳桿菌（ATCC 7469）進行葉酸的微生物法測定。35-37°C孵育16-18小時。


	

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